微藻营养丰富,是鱼、虾、贝等经济动物人工育苗的基础。微藻的来源则可以从天然水域的混杂生物群中,通过一定方法把所需藻类个体分离开来,从而获纯种培养。而在微藻的培养和应用中,保种技术十分重要,它是微藻培养和进一步应用的基础和关键环节。
1)、玻璃化保存法 玻璃化保存法是近年来发展起来的一种保存方法,与其他超低温保存方法相比,具有设备简单、程序简化和冻存效果好等优点。所谓超低温保存是区别于其它低温概念的冰箱温度(4℃~-40℃)和干冰温度(-79℃),是指在液氮低温(-196℃)下保存,此时生物体的物质代谢和生长活动几乎完全停止。可是它们仍处于可逆的成活状态。通过添加一定的抗冻保护剂,防止细胞在降温冰冻过程中严重脱水和低温休克,避免细胞内冰晶的形成,采用适当的冰冻速度,使细胞安全地越过冰晶形成危险区(从细胞介质或原生质的冰点到-60℃),进入玻璃化状态,以达到长期保存的目的。
2)、固定化保存法 固定化的藻种被保存在4°C下,黑暗中超过一年,仍然能够恢复正常的生长,固定化藻类其藻珠十分容易制备且比冷冻保存法来得便宜而且方便使用,可以保存在一般的冰箱中,固定化的藻类还可以很快的恢复自由到一般液体培养基中培养,有研究指出,藻种能够在胶珠内,在黑暗中低温下,能够长期的存活,主要的原因是【海南招聘网】的蛋白核的淀粉鞘提供【海南招聘网】生存基本的需求物质。
3)、平板划线分离法 由接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,使细胞数量随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来经培养后,便可达到分离纯化的目的。
4)、稀释分离法 取一定量待分离的材料,用培养液稀释。当稀释到适宜程度时,可以达到把原混杂生物单个分离培养的目的。
5)、生长曲线 把生长现象在图上用曲线表示出来的称为生长曲线。一般群体生长多呈s形曲线(sigmoid curve),这是最普通的生长曲线,可以分为延滞期,指数期,稳定期和衰退期4个阶段。在此将一定量的藻种接种于合适的培养基,在适宜的温度培养时,藻的生长具有规律性。处在不同时间的藻液,用分光光度计测定其吸光度值,以该吸光度值为纵坐标,以生长时间为横坐标,得到的曲线即为该藻种的生长曲线。
6)、BG-11培养基 培养基是发酵过程或动植物细胞大量培养中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物,以合成生物化工产品所必需的营养基质。培养基的选择应根据生物体生长代谢活动的需要,并有利于合成细胞物质和生物化工产品的生成。培养基中主要含有水、碳源(能源)、氮源、矿物质等。本次实验以淡水藻为主,所选培养基为BG-11培养基。
BG-11培养基( Blue-Green Medium)
Component Amount Stock Solution
(1) NaNO3 100 mL/L 15.0 g/L dH2O
(2) K2HPO4 10 mL/L 2 g/500 mL dH2O
(3) MgSO4·7H2O 10 mL/L 3.75 g/500 mLdH2O
(4 ) CaCl2·2H2O 10 mL/L 1.8 g/500 mL dH2O
(5 ) Citric acid 10 mL/L 0.3 g/500 mL dH2O
(6 )Ferric ammonium citrate 10 mL/L 0.3g/500ml dH2O
(7 ) EDTANa2 10 mL/L 0.05g/500ml dH2O
(8) Na2CO3 10 mL/L 1.0g/500ml dH2O
(9) A5 (Trace mental solution ) 1ml/L
H3BO3 2.86g/L dH2O
MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O
ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O
Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O
CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O
Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O
Adjust PH to 7.1 with 1M NaOH or HCl
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